L’hormone de croissance II

L’été dernier, nous avons publié un vaste article sur l’hormone de croissance.

Dans nos forums, nous discutons beaucoup des marques, des prix et de la qualité des produits de hormone de croissance, en particulier des produits chinois.

Generic Supplements, un laboratoire souterrain néerlandais, avait effectué plusieurs analyses par notre intermédiaire pour trouver un fabricant cohérent et fiable d’API (poudre brute).

Lorsqu’on m’a demandé d’essayer de trouver un laboratoire capable et désireux d’analyser des hormones peptidiques complexes, parce qu’ils voulaient analyser une version générique de l’hormone de croissance chinoise, j’étais très sceptique.

Grâce aux recherches effectuées dans l’article précédent sur l’hormone de croissance, j’ai appris que GeneScience détenait un brevet en Chine pour la fabrication de l’hormone de croissance à l’aide de la technologie de sécrétion.

Et cette méthode est la seule à produire 191 acides aminés hormone de croissance de grande pureté. Quand on nous a proposé un échantillon en janvier 2006, nous l’avons pris et nous étions très curieux d’en connaître le contenu.

Nous avons été surpris par les résultats. 

Il y a environ 7 endroits qui fabriquent de la poudre de HGH dans un laboratoire en Chine, principalement la variante de 192 acides aminés connue sous le nom de somatrem.

Sur les forums de discussion, on parle beaucoup des casquettes bleues ou rouges, mais cela ne veut rien dire, car personne ne sait exactement laquelle est obtenue, ni où elle a été emballée.

Ces bouteilles et couvercles sont disponibles et sont utilisés pour le conditionnement de toutes sortes de peptides.

Tout le monde parle de GeneScience Jintropin et de sa qualité, mais son technicien en chef a quitté GenSci il y a un an. Il possède toujours 6 % de la société, mais il l’aurait quittée en raison d’un litige.

Il a depuis commencé à produire la poudre générique de hormone de croissance, qui est la bonne hormone de croissance de 191 acides aminés (somatropine), bien qu’elle soit fabriquée sans licence BPF.

Cet individu vend la technologie et la poudre à de nombreuses personnes, et il y a donc de nombreuses nouvelles marques de HGH maintenant en circulation.

Une grande partie utilise cette poudre légitime, mais tous les produits fabriqués à partir de celle-ci sont-ils de qualité acceptable ? La réponse, bien sûr, est non.

Le principal problème de l’hormone de croissance est l’emballage. Il ne peut pas être conditionné dans une cuisine.

Il ne peut être conditionné dans un simple laboratoire avec une salle blanche de base ou un système climatique iso9001 (suffisant pour la production de comprimés).

Elle doit être effectuée dans une zone contrôlée très spécifique avec les machines appropriées. Sinon, la poudre, bien que bonne en soi, peut se dégrader et provoquer de l’urticaire ou des problèmes au point d’injection lorsqu’elle est administrée.

La poussière ne peut pas rester longtemps exposée à l’air, même la petite quantité emprisonnée dans un flacon lors de sa production. Le problème avec une licence de BPF en Chine est qu’elle n’est pas centralisée.

Chaque province a son propre personnel SFDA GMP. Hygetropin, par exemple, possède un véritable certificat GMP, qui peut être vérifié sur le site de la SFDA.

La FDA chinoise n’autorise que 8UI, ce qui en fait l’article approuvé. Une forme d’Hygetropin est fabriquée avec du 10IU, mais n’est produite que pour l’exportation sans l’approbation de la SFDA.

Cela vaut pour tous les fabricants chinois.

Alors, avec tous ces différents produits et réglementations, comment pouvez-vous dire que vous avez un produit de qualité hormone de croissance? Une façon de savoir si la poudre est correctement emballée est de faire très attention lorsque l’on ajoute le diluant au flacon de poudre.

Lorsque vous perforez l’aiguille (une petite aiguille à insuline est préférable) à travers le septum en caoutchouc, l’eau doit être aspirée dans le flacon sans pousser le piston.

En effet, il a été correctement emballé sans air, mais avec un vide à basse pression à l’intérieur. Il va littéralement aspirer le diluant pour remplir le vide.

Si vous devez presser la seringue pour injecter le liquide afin d’y entrer, ce n’est pas bon signe. Cela signifie probablement qu’il y a de l’air à l’intérieur du flacon et que votre poudre s’est dégradée dans une certaine mesure.

Dans le forum, il y a eu beaucoup de discussions sur ce genre de questions et nous avons décidé de faire plus de tests sur l’hormone de croissance chinoise. Ce sont les plus courantes :

Nous avons laissé le choix à nos membres, et ils ont choisi l’Hygetropin. Nous avons également effectué quelques analyses sur cet échantillon et avons comparé les échantillons entre eux.

Ce sont les données brutes de notre analyse. Le MW de la protéine a été déterminé à 22093 Da dans le mode linéaire de MALDI-MS. Ce chiffre est légèrement supérieur au MW calculé (21880 Da).

La différence pourrait être due aux oxydations des méthionines. La séquence d’acides aminés devrait être bonne. Ceci est également confirmé par l’empreinte de masse peptidique (PMF).

Nous mesurons également le PMF en mode linéaire car certains des peptides résultants sont assez longs et donc non visibles dans le mode réflecteur MALDI-MS.

Nous ne montrerons pas tous les graphiques dans cet article, car cela ne ferait qu’embrouiller le lecteur. Nous avons comparé les résultats de l’échantillon de suppléments génériques avec ceux du nouvel échantillon d’hygiène.

Les spectres de masse des peptides des deux produits hHGH sont similaires. La figure 3 est un chevauchement des deux spectres séparés en deux gammes de masse différentes.

En bas vous voyez le nouvel échantillon (Hygiène), en haut l’ancien échantillon (Compléments génériques). Le peptide N-terminal (930,5 Da) et le peptide C-terminal à 842,4 Da sont tous deux visibles dans les deux spectres.

Cette dernière est difficile à résoudre car elle est superposée par un signal dominant à 844,5 Da. On peut donc dire qu’au moins une partie de la molécule avait les bonnes bornes N et C.

Un Met-hGh peut être exclu car nous n’avons pas vu le peptide N-terminal à 1061,5 Da.

Des-Phe1-hGh peut également être exclu en raison de l’absence du peptide N-terminal à 783,4 Da.

Cependant, il existe également des différences au sein des deux échantillons. Par exemple, la masse à 1628,9 Da n’est présente que dans le nouvel échantillon, et ne s’explique pas par la digestion théorique.

La masse à 1274,6 Da est considérablement augmentée dans le second échantillon. La masse de 1438,7 Da n’est présente que dans l’ancien échantillon, ainsi que les grandes masses, 3957,9 Da, et 4086,0 Da.

Toutes ces masses ne sont pas expliquées par la digestion théorique. Nous pourrions faire des MALDI-MS/MS pour obtenir les séquences correspondantes, si nous voulions…

Il peut s’agir d’erreurs dans la séquence correcte, de changements dans la séquence attendue ou de contamination. Le peptide différentiel à 1490,7 Da est dérivé de la trypsine.

Figure 4

Nous avons lu le résumé théorique, mais comprenons-nous ce qu’il signifie ? Dans le corps, cette hormone de croissance humaine recombinante est une longue chaîne de 191 acides aminés, avec une masse moléculaire ou un poids moléculaire de 22 KDa, 22000 Dalton ou 22 KiloDalton.

Cette hormone est digérée par voie enzymatique en différents fragments. Ces fragments ont une certaine séquence d’acides aminés différents et un poids qui lui est lié.

Sur la gauche, vous verrez un graphique de l’hormone de croissance humaine. Pour faciliter la compréhension, nous avons coloré les différents fragments en différentes couleurs (figure 4).

Lorsque les analystes trouvent dans le graphique des masses qui ne devraient pas être là à cause de la digestion théorique, ils appellent ces masses “non expliquées par la digestion théorique”.

Ces résultats sont-ils suffisants pour vous ou voulez-vous que nous confirmions les séquences peptidiques sélectionnées par MALDI-MS/MS ?

Nous voulions être sûrs, alors nous avons demandé au laboratoire d’identifier ces masses inattendues par MALDI-MS/MS.

MALDI-MS/MS

Les protéines intactes sont ionisées par désorption/ionisation laser assistée par matrice (MALDI), puis introduites dans un analyseur de masse. Dans la seconde, les protéines sont digérées par voie enzymatique en peptides plus petits à l’aide d’un agent (trypsine).

La collection de produits peptidiques est ensuite introduite dans l’analyseur de masse. L’analyse de masse des protéines entières est principalement réalisée à l’aide d’une méthode de temps de vol (TOF), ou résonance cyclotronique des ions de la transformée de Fourier (FT-ICR).

Ces deux types d’instruments sont privilégiés ici en raison de leur large gamme de masse, et dans le cas du FT-ICR, de leur grande précision de masse.

L’analyse de masse des peptides protéolytiques est une méthode beaucoup plus populaire de caractérisation des protéines, car des instruments moins coûteux peuvent être utilisés pour la caractérisation.

En outre, la préparation des échantillons est plus facile une fois que les protéines entières ont été digérées en fragments peptidiques plus petits.

La MS en tandem (MS/MS) est une méthode expérimentale de plus en plus populaire pour l’identification des protéines. La dissociation induite par collision est utilisée dans les principales applications pour générer un ensemble de fragments d’un ion peptide spécifique.

Le processus de fragmentation se traduit principalement par des produits de clivage qui brisent les liaisons peptidiques.

En raison de cette simplicité de fragmentation, il est possible d’utiliser les masses de fragments observées pour les faire correspondre à une base de données de masses prédites pour l’une des nombreuses séquences peptidiques données.

Voici les couvertures des séquences des spectres des résultats MALDI-MS/MS des masses de peptides inexpliquées Deux d’entre eux (1252,6 et 2726,3) se sont révélés être des peptides de somatotrophine mal divisés avec de bons scores.

Le troisième (1380,7) a été identifié comme étant la protéine ASAH (voir l’interrogation de la base de données), mais le score était très faible, donc je pense qu’il s’agit d’un résultat faussement positif.

Comparez la couverture de la séquence (les ions “b” et “y” sont importants) des deux peptides de la somatotrophine avec celle du troisième peptide (1380,8 Da).

Dans les premiers spectres, presque tous les signaux sont expliqués par des ions y ou b.

Dans le troisième spectre, de nombreux pics ne sont pas du tout expliqués, donc le résultat est probablement erroné.

Tous les autres peptides ont eu des scores faibles, et je ne croirais pas les scores d’animaux de compagnie de > 30. Et un score d’animal de compagnie inférieur à 30 est une limite pour un seuil qui peut être cru ou non. Ils sont considérés comme des faux positifs.

Figure 5

Les peptides mal coupés que nous avons identifiés ont très probablement été générés lors de la digestion triptique.

Ils n’expliquent rien sur les différences de qualité des différents lots.

Ils sont produits en raison de conditions légèrement différentes au cours de la digestion tryptique.

Si nous digérons les bandes SDS-PAGE, nous ne connaissons pas exactement la teneur en protéines de ces bandes.

C’est pourquoi nous leur ajoutons une quantité standardisée de trypsine. En fonction de la quantité réelle de protéines, il existe différents rapports protéines/trypsine dans différents échantillons.

Cela peut entraîner plus d’erreurs de séparation (pas de sites de séparation K ou R) que dans les échantillons ayant une concentration de trypsine plus faible. En outre, la température, le pH, le temps d’incubation, etc. sont d’autres facteurs qui influencent la digestion.

Ainsi, même si nous trouvons des peptides divisés différemment, les échantillons de protéines d’origine peuvent être identiques. La seule chose qui nous permet de différencier les échantillons serait les peptides dérivés d’autres protéines (contaminations), ou les peptides dont la séquence est différente de la séquence originale.

Cependant, nous n’avons pas été en mesure d’identifier ce type de peptides. Cela pourrait indiquer que les deux échantillons sont effectivement très purs.

Peut-être devriez-vous nous envoyer un échantillon moins pur, nous pourrions alors facilement voir les différences, même en SDS-PAGE.

La FDS-PAGE ne montre aucune contamination ni aucune contamination [dans Hygetropin].

Sites d’information indépendants sur l’hormone de croissance

Un nouveau phénomène semble être les sites de recherche informatifs sur l’hormone de croissance humaine.

Ces sites web proviennent souvent de fabricants chinois, par exemple www.hgh-research.com et www.somatropin.net.

Il semble qu’un groupe de fabricants chinois d’hormones de croissance ait en fait lancé ce dernier site web.

Ce site web veut “informer les utilisateurs et s’opposer à l’abus d’hormones de croissance”, selon un communiqué de presse.

Mais le site web est en fait un ingénieux outil de marketing de GeneScience, le fabricant de la marque d’hormone de croissance Jintropin.

Le message de presse annonçant le lancement de somatropin.net est étonnamment honnête quant à l’identité des principaux utilisateurs de l’hormone de croissance.

Il ne s’agit pas d’enfants souffrant d’un déficit en hormone de croissance, mais d’athlètes, de culturistes et de fans de l’anti-âge.

L’explication de l’utilisation de l’hormone de croissance met l’accent sur les effets positifs, et accorde relativement peu d’attention aux effets secondaires : “L’hormone de croissance peut favoriser la croissance des muscles maigres et la perte de poids, peut augmenter l’énergie, réduire le temps de récupération entre les séances d’entraînement, guérir les tissus endommagés et renforcer les articulations et les ligaments.

L’hormone de croissance est également couramment utilisée comme médicament anti-âge pour prévenir et réparer les dommages responsables des rides de la peau, de l’ostéoporose et des pertes de mémoire.

Ce n’est pas de l’information. C’est de la publicité, et une simplification excessive dans sa forme la plus pure. Tout le monde sait que le vieillissement s’accompagne d’une diminution des niveaux d’hormones.

Le simple fait de compléter l’hormone de croissance jusqu’à ce que les niveaux de jeunesse soient atteints ne défera pas les signes du vieillissement.

Cela ferait de l’hormone de croissance la source de la jeunesse, ce qui n’est pas le cas.

Il n’est pas clair qui sont les personnes derrière somatropin.net. Dans un communiqué de presse sur le site figurent les noms de trois entreprises : GeneScience Pharmaceuticals, Neogenica BioScience et AnkeBio.

Neogenica est la plus importante dans le communiqué de presse, puisque le message cite “un porte-parole” de Neogenica, alors que personne d’autre n’est cité après cela. “Nous voulons essentiellement arrêter

Les escroqueries à l’hormone de croissance permettent de prévenir les abus et d’informer les gens sur ce que l’HGH peut et ne peut pas faire pour eux”, selon les informations de Neogenica.

Pour le reste, vous ne trouverez pas d’informations sur Neogenica à l’adresse www.somatropin.net. Il n’y a aucun doute sur le pourquoi.

Neogenica ne vend aucune hormone de croissance, seulement de l’IGF-1. Neogenica a lancé sa préparation de Revitropine IGF-1 LR3 en mars 2006.

Et il ne fait aucun doute qu’il s’agit d’un produit spécialement destiné aux carrossiers.

“L’IGF est le plus efficace pour provoquer directement la croissance musculaire et l’augmentation de la densité”, explique Neogenica. “Le FGI est également beaucoup plus rentable”.

Neogenica expédie ses produits “discrètement”. C’est aussi un fait agréable à savoir, mais comment Neogenica est-elle impliquée dans somatropin.net ? Eh bien, il semble que Neogenica soit directement liée à GeneScience.

Le communiqué de presse sur l’introduction de Revitropin par Neogenica a été rédigé par David Garcia. Ce nom est celui de la personne qui a enregistré somatropin.net.

Les informations peuvent être vérifiées par une recherche rapide sur whois.org. Mais ce David a aussi une adresse électronique, qui finit par aller sur un compte à genescience.cn.

GeneScience vendait autrefois du LR3-IGF-1, sous la marque Igtropin. Je pense que l’Igtropin est identique à la Revitropin, mais maintenant, parce que c’est un produit destiné aux culturistes, il n’est pas associé à GeneScience, du moins publiquement.

Quoi qu’il en soit, une fois que vous savez qui contrôle le site somatropin.net, vous réalisez à quel point ce site est ingénieux et quelle est la véritable intention de ce site.

Somatropin.net est un outil de marketing qui met les concurrents en mauvaise posture et incite les lecteurs/clients à acheter les produits GeneScience. Sur somatropin.net, vous trouverez une comparaison des prix. Un coup d’œil rapide et vous verrez que les marques européennes sont trop chères.

Si vous voyez la différence de prix, le message est clair : “vous devez être fou pour acheter ces produits au lieu des produits chinois”.

L’Ansomone d’AnkeBio, ou le Fitropin de Kexing, sont également bon marché. Mais sur la première page, le site indique au visiteur que ces composés, comme le Tev-Tropin de Teva Pharmaceuticals, ne contiennent pas de véritable somatropine, mais seulement du somatrem.

Là encore, le somatrem est une variante plus ancienne de l’hormone de croissance, qui contient un acide aminé de plus que l’hormone de croissance endogène, et est considérée comme moins efficace.

En outre, le site web révèle que la Fitropine de Kexing n’est pas une somatropine. “Parce que GeneScience Pharmaceutical Co., Ltd. détient le brevet de fabrication de l’hormone de croissance par la technologie de sécrétion en Chine, Kexing ne peut pas fabriquer son produit par un moyen aussi pur et efficace.

Si vous voulez la véritable hormone de croissance 191aa, et que vous ne voulez pas payer plus de quelques dollars pour une UI, alors vous n’avez qu’une seule option selon le site web, Jintropin de GeneScience.

Ce qu’ils ne vous disent pas, c’est qu’il existe davantage d’hormones de croissance génériques chinoises, et des marques moins chères, comme Hygetropin par exemple.

Celle-ci semble être tout aussi bonne selon notre analyse. Certains membres ont même affirmé que l’effet de Jintropin était parfois moindre que celui d’autres marques, doutant même de sa qualité.

C’est pourquoi nous avons envoyé un échantillon de Jintropin et un échantillon de suppléments génériques au département de toxicologie d’une très célèbre université, où un professeur de doctorat analysera soigneusement les échantillons pour vérifier la contamination et la pureté des peptides.

Vous trouverez les résultats dans notre prochain numéro.

D’ici là, nous ne ferons aucun commentaire négatif sur Jintropin. Mais c’est pourquoi nous avons ajouté l’Hygetropin à notre comparaison de prix.

Depuis que John a quitté GeneScience, je pense qu’un produit utilisant sa poudre comme Hygetropin est aussi bon que n’importe quel autre fabricant certifié.